脱色离心工资如何

高。海门市其林贝尔仪器制造有限公司是生产实验仪器及医用塑料制品专业工厂，产品有脱色摇床、万向摇床、高速分散器、紫外设备、振荡器、离心机、混合器等，员工工资高，待遇好，安全可靠。

摇床和恒温培养箱有啥区别

摇床和恒温培养箱的区别是:恒温培养箱的功能就是加热、恒温。

摇床具备培养箱的功能另外为防止实验液体沉淀不均匀，所以需要摇床一直摇动。

上海捷呈实验设备有限公司

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MTT法测24孔板时 细胞数多 二甲基亚砜（DMSO）溶解甲瓒后溶液颜色深的孔 吸光度反而低

MTT原理

MTT全称为3-(4,5)-dimethylthiahiazo (-z-y1)-3,5-di- phenytetrazoliumromide,汉语化学名为 3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐,商品名：噻唑蓝.是一种黄颜色的染料.

MTT比色法,是一种检测细胞存活和生长的方法.其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan）并沉积在细胞中,而死细胞无此功能.二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲瓒,用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值,可间接反映活细胞数量.在一定细胞数范围内,MTT结晶形成的量与细胞数成正比.该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性试验以及肿瘤放射敏感性测定等.它的特点是灵敏度高、经济. 缺点：由于MTT经还原所产生的甲瓒产物不溶于水,需被溶解后才能检测.这不仅使工作量增加,也会对实验结果的准确性产生影响,而且溶解甲的有机溶剂对实验者也有损害.

MTT 溶液的配制方法 通常,此法中的MTT 浓度为5mg/ml.因此,可以称取MTT 0.5克,溶于100 ml的磷酸缓冲液（PBS）或无酚红的培养基中,用0.22μm滤膜过滤以除去溶液里的细菌,放4℃ 避光保存即可.在配制和保存的过程中,容器***用铝箔纸包住.实验的时候我一般关闭超净台上的日光灯来避光,觉得这样比较好. 需要注意的是,MTT法只能用来检测细胞相对数和相对活力,但不能测定细胞**数.在用酶标仪检测结果的时候,为了保证实验结果的线性,MTT 吸光度***在0-0.7 范围内.

MTT一般***现用现配,过滤后4ºC避光保存两周内有效,或配制成5mg/ml保存在-20度长期保存,避免反复冻融,***小剂量分装,用避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光以免分解.我一般都把MTT粉分装在EP管里,用的时候现配,直接往培养板中加,没必要一下子配那么多,尤其当MTT变为灰绿色时就**不能再用了.

MTT有致癌性,用的时候小心,有条件***带那种透明的簿膜手套.配成的MTT需要无菌,MTT对菌很敏感；往96孔板加时不避光也没有关系,毕竟时间较短,或者你不放心的时候可以把操作台上的照明灯关掉.

配制MTT时用PBS（ph=7.4）溶解.PBS配方：Nacl 8g ＋ Kcl 0.2g ＋ Na2HPO4 1.44g ＋ KH2PO4 0.24g调pH 7.4,定容1L.

普通MTT法实验步骤：1：接种细胞：用含10％胎小牛血清得培养液配成单个细胞悬液,以每孔1000-10000个细

胞接种到96孔板,每孔体积200ul.2: 培养细胞：同一般培养条件,培养3-5天（可根据试验目的和要求决定培养时间）.3：呈色：培养3-5天后,每孔加MTT（噻唑蓝）溶液（5mg/ml用PBS配制,pH=7.4)20ul.继续孵育4 h,

终止培养,小心吸弃孔内培养上清液,对于悬浮细胞需要离心后再吸弃孔内培养上清液.

每孔加150ul DMSO,振荡10min,使结晶物充分融解.4：比色：选择490nm波长,在酶联免疫监测仪上测定各孔光吸收值,记录结果,以时间为

横坐标,吸光值为纵坐标绘制细胞生长曲线.

药物MTT法实验步骤贴壁细胞：1: 收集对数期细胞,调整细胞悬液浓度,每孔加入100ul,铺板使待测细胞调密度 1000-

10000 孔,（边缘孔用无菌PBS填充）.2: 5%CO2,37℃孵育,至细胞单层铺满孔底（96孔平底板）,加入浓度梯度的药物,原则上,

细胞贴壁后即可加药,或两小时,或半天时间,但我们常在前一天下午铺板,次日上午

加药.一般5-7个梯度,每孔100ul,设3-5个复孔.建议设5个,否则难以反应真实情况3: 5%CO2,37℃孵育16-48小时,倒置显微镜下观察.4: 每孔加入20ulMTT溶液（5mg/ml,即0.5%MTT）,继续培养4h.若药物与MTT能够反应,

可先离心后弃去培养液,小心用PBS冲2-3遍后,再加入含MTT的培养液.5: 终止培养,小心吸去孔内培养液.6: 每孔加入150ul二甲基亚砜,置摇床上低速振荡10min,使结晶物充分溶解.在酶联免

疫检测仪OD490nm处测量各孔的吸光值.7: 同时设置调零孔（培养基、MTT、二甲基亚砜）,对照孔（细胞、相同浓度的药物溶解介

质、培养液、MTT、二甲基亚砜）.

悬浮细胞：1: 收集对数期细胞,调节细胞悬液浓度1×106/ml,按次序将①补足的1640（无血清）培

养基40ul ；②加Actinomycin D（放线菌素D有毒性）10ul用培养液稀释 (储存液100g/ml,需预试寻找***稀释度,1:10-1:20)；③需检测物10ul；④细胞悬液50ul（即5×104cell/孔）,共100ul加入到96孔板（边缘孔用无菌水填充）.每板设对照（加100l 1640）

2: 置37℃,5%CO2孵育16-48小时,倒置显微镜下观察.3: 每孔加入10 ul MTT溶液（5 mg/ml,即0.5%MTT）,继续培养4 h.（悬浮细胞推荐使用

WST-1,培养4 h后可跳过步骤4）,直接酶联免疫检测仪OD570nm（630nm校准）测量各孔的吸光值）

4、离心（1000转x10min）,小心吸掉上清,每孔加入100 ul二甲基亚砜,置摇床上低速振荡10 min,使结晶物充分溶解.在酶联免疫检测仪OD570nm（630nm校准）测量各孔的吸光值.

5、同时设置调零孔（培养基、MTT、二甲基亚砜DMSO）,对照孔（细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT、二甲基亚砜）,每组设定3复孔.

注意事项：(1) 选择适当得细胞接种浓度.(2) 避免血清干扰：一般选小于10％的胎牛血清的培养液进行试验.在呈色后尽量吸尽孔

内残余培养液.(3) 设空白对照：与试验平行不加细胞只加培养液的空白对照.其他试验步骤保持一致,

最后比色以空白调零.

(4) MTT实验吸光度最后要在0-0.7之间,超出这个范围就不是直线关系.

(5) 用96孔板培养细胞做MTT测细胞活力,应该加多少1640培养基,多少MTT和DMSO合适

根据书上说的加200ul1640,20ulMTT,150ulDMSO 加DMSO之前要尽量去掉培养液,便于

DMSO溶解甲臜颗粒进行比色测定

(6) 一般每孔4000个细胞为宜,既细胞浓度在20000个/ml,MTT加20ul,作用四小时后洗掉上清液,注意不要将甲瓉洗掉,然后每孔加150ul DMSO,在脱色摇床上振荡10分钟,然后测吸光值.

脱色摇床做什么用的

在细胞的培养中少不了需要用到脱色摇床，它可以可以上下摇动，整体做旋转晃动，使得细胞得到均匀的脱色或者染色！

脱色摇床是指台式小型，用于蛋白电泳的脱色过程，一般只有很低的转速，是开发性的，体积相对较小脱色摇床是一种工作方式为摇摆式的摇床，在同类产品中技术较先进，具有质量可靠，运行平稳，噪音小，无级调速等特点，是生化、生物工程、教学、微生物及医学等行业研究和生产中的优选设备。

脱色摇床主要是指跑电泳时染色、脱色，还有细胞培养等需要的，其主要就是较小，而且上面的台面一般是平的，做水平回旋（现在也有一些可以上下摇动，整体做旋转晃动，这样摇晃的均匀度和一致性比较好）。

采用永磁直流电机作为动力，通过先进的电子调速电路，能够保持较为平稳的运动速度，同时具有使用寿命长，维护简单，操作方便的优点。

脱色摇床和普通摇床有什么区别？

一般来说，摇床是指培养细胞（多为细菌）用的，有一定的转速（如200rpm）与温度控制的（如37度），是密闭性的，相对较大些；脱色摇床是指台式小型，用于蛋白电泳的脱色过程，一般只有很低的转速，是开发性的，脱色摇床要小巧一些，摆动更加温和。有时候普通的摇床也可以完成脱色摇床的工作，不过以来比较麻烦，二来也比较容易造成污染！

这个摇床不分好坏，具体看做哪些实验。

仪器：脱色摇床的原理和应用

应用：电泳凝胶分离谱带的固定，考马斯蓝染色和脱色时的振荡晃动，硝酸银染色时的固定，染色，显影等，放射自显影实验中X光底片的显影、定影，电泳转移后纤维素膜的进一步处理，抗原—抗体的反应和染色，分子杂交，细胞培养等．凡样品需要在溶液中晃动的实验均可选用该仪器。

原理：详细的原理我也不清楚，可能就是单纯的摇晃震动吧！

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