欢迎光临货拉客微商网官网！
超氧化物歧化酶(SOD) 超滤法生产新工艺
前 言
SOD的中文名称是超氧化物歧化酶，其英文名为Superoxide dimutase，分子量(牛血红细胞) 约 32000 是广泛存在生物体内的金属蛋白醇 ， 别名有 ： orgotein，ormetein，ontosein； Cu.Zn-SOD；Palosein等，SOD被科学家誉为21世纪最有发展前途的药用酶。
一、本工艺是从红细胞，肝和其它哺乳动物组织分离而得的金属酶；含两个亚基，每个亚基各含一个铜原子和一个锌原子，SOD可催化O2，歧化为H2O和O2， 其性质不仅仅取决于酶蛋白，而且还取决于活性部位的金属离子，按金属离子类型不同， 可分为Cu.Zn--SOD和Fe--SOD，Mn--SOD三种.在一般条件下，SOD较稳定. 不同来源的 Cu.Zn--SOD，其紫外吸收光谱略有差异，如牛血SOD在258nm处显示***吸收，而猪血SOD的***吸收峰为265nm，在特定条件下，酶的活性可下降，甚至完全丧失， 如氰化物可抑制SOD活性，双氧水使SOD活性下降，氯化胍能明显抑制SOD活性等。
二、SOD用途主要是基于SOD是超氧阴离子清除剂，超氧阴离子(O2~)是人体内有毒物质，它能引起多种疾病，故能清除炎症过程中伴同产生的超氧离子， 而显示出强大的抗炎作用。
在医药工业：SOD可以**由于超氧离子引起的各种疾病，如糖尿病，白内障， 风湿性关节炎等，也是消炎的有效药物，而且还能抗衰老，抗肿瘤，抗辐射， 抗自身免疫疾病，现代研究表明：SOD还能治高血压，冠心病，胆囊炎，肺气肿等难治之症. 日用化学工业：由于SOD有防止细胞老化和解毒等功效， 因此在化妆品和护肤剂等工业产品中，添加SOD之后，具有防晒，祛斑，使皮肤柔嫩的作用.是目前化妆品行业中不可缺少的一种添加剂，国内及同行都已出现大量产品.食品工业：在食品添加剂加 SOD之后，增强营养，解除毒性，延长体内细胞寿命，国内已有SOD营养液产品， 并通过上海科研单位有关专家的鉴定。
三、SOD的开发前景：目前SOD在全国仅有少数科研单位及生化制药厂研究和开发本产品，而使用SOD产品厂家却日益增多，远不能满足市场需求 . 为鼓励和大力开发SOD新产品，国家已将其列入重点科技开发项目，并投放大批经费，现已获得成功， 开始向企业化生产转移，市场前景十分广阔。
四、注意事项：(1)我中心热忱欢迎社会各界朋友现场学习，由生化工程师向您授课，通过现场操作，指导，培训，使您尽快掌握该技术。(2)本工艺， 技术资料等不经我公司同意，不得擅自转让，翻印，销售给任何单位和个人，违者法律追究。
新法提炼技术
一、主要设备：(1)工业用离心机一台；(2)恒温水浴锅(10L--50L)(可自制)1台；(3)冰柜1台；(4)搅拌机1台；(5)玻璃器皿：1000ml，500ml烧杯各3只，50ml烧杯 2 只，50ml，500ml量杯各1个；(6)塑料桶若干个。
二、主要试剂：(工业纯度)柠檬酸钠，柠檬酸，葡萄糖，乙醇90%，氯仿，丙酮，氯化钠，磷酸氢二钠，磷酸二氢钠，去离子水或蒸馏水，葡萄糖凝酸胶SephadexG-- 100 和DEAE--纤维素.
三、试剂的配制：
1.抗凝剂配方：(1)柠檬酸钠30g，柠檬酸10g葡萄糖 25g加水至1升，一般此种是每7ml血液，加1ml(抗凝剂).(2)40g/升柠檬酸钠溶液：在1升水中加入0.9克的氯化钠。
2.生理盐水：(0.9%)在91克水中加入0.9克的氯化钠。
3.磷酸盐缓冲溶液的配制：PH7.6，0.2M磷酸盐缓冲溶液，一般用Na2HPO4.H2O，35. 61 克 / 升和NaH2PO4.2H2O 31.21克/升，前者加87.0ml，后者加13.0ml混合后即为PH=7.6 缓冲溶液，如果用K2HPO4.3H2O为45.644g/升，NaH2PO4.2H2O为31.21克/升，仍是前者87.0ml，后者13.0ml混合后即得。
4.冷却剂：在本工艺中有使用-15度低温，一般用如下配方：用33克食盐加入100克雪或碎冰，以此比例配成混合体可达-21.3度。
四、工艺流程
(一)除血红蛋白
1.血液抗凝处理，在新鲜牛、马、猪血中迅速加入ACD1号抗凝剂，并缓慢搅匀，每7毫升血液中加入抗凝剂1毫升或2号抗凝剂。
2.把抗凝处理的血液放入离心机，以3000r/min离心约15--20分钟， 用吸管把上清液(黄色血清)小心吸去抛掉，下层的红血球用2--3倍生理盐水洗2--3次，在每一次洗涤中，用离心机以3000r/min离心，7--8分钟，反复操作后，得到洗涤血红细胞，洗涤后的血红细胞在-15度下冷冻可保存半年并不影响产率和比活，在血液量大， 处理不完时必须这样做。
3.在洗净的红血球中加入等体积去离子水，剧烈搅拌30分钟，使红血球细胞壁砍碎，以使其内的SOD浸出.***在0--4度静止过夜后，把溶血进行有机提取。
4.接着向溶血中缓缓加入0.2--0.25倍体积的预冷(-15度)95%乙醇和0.1--0.15倍预冷氯仿，搅拌10--15分钟后，原溶血呈浆糊状，静止1--2小时，用滤布除去凝固的血红蛋白，然后将滤液2500r/min离心约1--5分钟留上清液抛去沉淀， 此时如果上清液略为微黄色时，可用快速过滤纸过滤，可得到微带蓝色的清澈透明的粗酶液。
(二)粗酶液的初步提纯：
1.丙酮提醇：向酶液中加0.8倍量预冷(-15度 ) 丙酮 ， 生成大量白色沉淀 ， 以3000r/min离心2分钟收集沉淀，上清液可不必吸取，直接倾倒。
2.热变性：(除杂蛋白)准备好衡温浴锅，在本工艺中，提前30分钟， 注满水接通电源后，使之加热到55--60度以省时间，将沉淀量约50倍量体积比加入0.2MPH=7.6磷酸钠缓冲溶液，水浴加热至60度，15分钟后迅速冷却到室温.3000r/min离心2 分钟得上清液，在上清液中，缓缓滴加0.6倍体积的预冷(-15度)丙酮，生成白色沉淀。
3.初纯SOD：在上述沉淀中加去离子水，制成20--30%SOD溶液，分装入样品瓶中，放入冷冻干燥机中，于开机后以0.2--0.1Torr真空度，约1.5--2小时， 得到化妆或食品用SOD，该产品比活大于3000u/mg，外观呈微带蓝色的白色冻干品。
(三)SOD进一步提纯：
SOD精品一般是把SOD产品经过柱层析，柱层析后的SOD没有小分子等杂质， 层析后为高活性的SOD大分子.SOD精品价格更高，它主要作为生物化学试剂， 化验室标准试剂试用.目前SOD柱层析有两种，二者可单独使用，也可结合使用，一般是DEAE-- 纤维素层析和SephadcxG--100葡聚糖凝胶层析，将(二)2，热变性后SOD丙酮沉淀用PH7.6，0.2MNaH2PO4-NaHPO4缓冲溶液溶解，有不溶的杂蛋白时.离心抛去沉淀，上清液上DEAE--纤维素或SephadsxG--100层析柱(1*20cm或2.5*30cm)，梯度洗脱 ， 洗脱液为PH7.6，0.2M，NaH2PO4--NaHPO4缓冲液，下流速度控制在0.2--0.5ml/min，在分光光度计上用紫外谱325nm处测流出液，合并活力峰，再用蒸馏水反复透析，透析彻底后， 放入样品皿置于冷冻干燥机中干燥后即得SOD精品。
五、注意事项：
1.掌握适当的温度和时间：虽然SOD对热较稳定， 但在分离纯化过程中***还是采用较低温度，一般以0--10度为宜，时间长不要超过3天。
2.注意提取，提纯方法：使用有机溶剂或者加热均能有效沉淀蛋白质， 但掌握适当溶剂和加热结合的办法可以达到***效果。
六、SOD的检测方法：活性检验，比较方便的办法是用连笨三酚自氧化法， 先测得连笨三酚的自氧化速率，然后加入SOD再测得加入SOD之后的氧化速率，按照酶活性单位定义，即在***条件下，每分钟抑制连笨三酚自氧化分解速率达50% 的酶量定义为一个酶单位.依次求出活力总值 ，同时也可以用聚丙烯酰胺凝胶电泳来测定其纯度，看其分子量32000左右的一条带是否与有关文献指导一致.
超氧化物岐化酶(superoxide dimutase 简称SOD)是一种重要的氧自由基清除剂，作为一种药用酶，引起国内外生化届和医药届的极大关注。SOD应用于医学临床上可以**多种疾病，类风湿性关节炎、心肌梗塞等，在防辐射，抗衰老，抗肿瘤等方面也有积极的作用，而且广泛用于化妆品和食品添加剂的行列。
自1969年Mccord和Fridovich 首次发现从牛血细胞中发现超氧化物岐化以来，到目前为止，国内已有几十家科研单位对SOD作了大量的研究和试产工作，而且有些已批量生产。SOD引起了国内生化界的重视，1988年在浙江宁波如开了《全国首届SOD学术会议》。1989年4月在河南开封《第三届药用酶学术会议》上，SOD被列为重点开发项目，90年7月在大连《全国第二届SOD学术会议》，SOD已作为一种药用酶发展较快，将成为一种很有前途的生化产物。
SOD是一种广泛存于动物、植物和微生物的生物酶，国外药用SOD系从血中提取，国内SOD已开发的品种已超过20种，证明我国对SOD的研究和应用已进入新时期。
我国从牛、马、猪、鸡、狗等动物血中提取SOD来源丰富，成本低，提取和纯化较方便，药细胞膜易破，用常规分离纯化法可获得高纯度的SOD。
本技术采用热变性，超滤新技术，不仅大大简化了工艺过程，而且产品质量和收率都比老工艺有较大的提高，其提取的SOD均为CuZu-SOD。
一、药品与仪器：
(1)柠檬酸三钠：Na3C6H6O7 (2)工业丙酮CaH6O
(3)邻苯本酚 (4)酸磷钾K3Poe4
(5)弱碱性阴离子交换剂DEAE Sephadsxa-50外观40-120ubrd或者DEAE-cell-ujose(DE-32)二乙基纤维素。 (6)冷冻干燥器(自己组配)
(7)层折柱(7.5＊30cm) (8)离心机
以上试剂及其它药剂、仪器可在各省市化学试剂商店、医疗器械商店购买。
二、Cu、Zu-SOD的提取及纯化(牛、马血为例)
1、工业流程：
加抗凝剂 盐洗
鲜牛血---------------------红血球------------------------
离心除黄色血浆 加NaCL
热变性1 热变性2
压积红细胞--------------淡黄色混合液---------------------
68度30分钟 60-65度20分钟
加丙酮 加丙酮 层析
浅蓝色清液-----------絮状沉淀--------------沉淀------------
冻干
透析除盐
洗脱-----------------透析液---------SOD(冻干品)
2、提取方法
(1)收集红细胞：鲜牛血100升，加入3. 8％柠檬酸三钠抗凝剂搅拌均匀，静置，使红细胞自然沉降，除去上层大部分血浆，下层液再离心除尽其余血浆，再加入3倍量0.9％氯化钠(精制食盐)洗涤两次， 离心可收集到压积红细胞(40升)。
(2)热变性1：收集的红细胞再加入4公斤氯化钠，40克氯化铜，蒸馏水100升搅匀，水浴加热到68度恒温30分钟，迅速冷却加至室温，过滤除沉淀，收集滤液。
(3)热变性2：滤液在65度恒温水浴下，向滤液中慢慢中入40克氯化铜，至滤液清澈变为淡蓝色为止，保温20分钟，迅速冷却至室温，离心去沉淀得上清液。
(4)SOD粗品：超滤心清液加入0.75倍全积的丙酮沉淀， 离心收集沉淀于离于水，离心除去不溶物得清液，清液加入0.75倍体积的丙酮沉淀， 离心收集沉淀，沉淀经无水丙酮洗涤脱水两次，真空干燥得淡蓝色粉末状SOD粗品
(5)SOD粗品提纯：SOD粗品溶于2.5mmol/L，PH值7.6磷酸钾缓冲液，将该混合液上在7.5＊30cm的层柱上，离子换剂为DEAE-SphadexA-50(该柱事先用缓冲平衡)，以100～200ml/小时速度上样，完毕后用同一缓冲A280mm值，低于0.02然后用25～200mmol/L，PH值7.6磷酸钾缓冲液进行直线梯度分段洗脱，流速为100ml/小时。用部分收集器收集， 洗脱液经透析除盐后，得浓缩的透析液，经冷冻干燥，得SOD成品，(呈浅绿色)。
三、SOD活性测定：
SOD的测定方法很多，常见的有化学法，免疫法等电点聚焦法等，化学法测定的原理主要是利用有些化合物如邻苯三酚，在自氧化过程中会产生有色中间物降超氧游离基(O2)这样就可以利用SOD分例(O2)。阻止中间物的积累而测定其酶活性。
1、试剂及仪器
(1)邻苯本酚分析纯，用10mmol/LECL配成50mmol/L溶液。
(2)UV－754紫外分光光度计。
2、测定方法：
(1)邻苯三酚自氧化速度的测定。
在25度、45ml`50mmol/L、PH值8.3、K2HPO4－KH2PO4缓冲液中加入10mmol/L的邻苯三酚，迅速摇匀，倒入光径1cm的比色杯内，在325mm波长下每隔30秒测A值一次，要求自氧化速度控制在0.0700d/mm 左右。
(2)SOD或粗酶抽提液活性测定：
测定方法同测邻苯三酚自氧化速度，在加入邻苯三酚前加入待测SOD样液，测得数据按以下公式计算酶活性。
0.0700－A325mm/min
----------------------------------------＊100％度
0.70
样液稀释倍数 样液稀释倍数
酶活性(u/m1)＝------------＊反应液总体积＊----------------
50％ 样液体积
3、蛋白浓度(mg/ml)和蛋白的计算：
SOD或粗酶抽提液，经280mm紫外比色测定后，查牛轿清白蛋的标准曲线，由此算出每ml含ug蛋白的量。
蛋白浓度＝ug蛋白/ml＊样液稀释倍数＊10负3次方＝mg蛋白/ml总蛋白＝mg蛋白/ml＊原液总体积＝mg蛋白。
4、比活(u/mg蛋白)的计算：
单位活力(u/ml) 总活力
比活＝-----------------------＝-----------------＝u/mg蛋白
蛋白的浓度(mg蛋白/ml) 总蛋白
四、Cu、Zn－SOD性质：
1、Cu、Z n－SOD呈蓝绿色，分子量在3200左右，由两个中一个Cu和一个Zn。
2、对热稳定，天然牛血SOD，75度下加热数分钟其酶活丧失很小。
3、PH值对SOD的影响，SOD在PH5.3～10.5范围内，其催化速度不受影响，PH3.6时SODZn脱落95％，PH12SOD构象发生不可递的构象，导致酶活性丧失。
4、SOD的紫外线吸收特征：SOD在280mm处没有吸收高峰。
5、金属辅其与酶活性。SOD属金属酶Zn仅于分子结构有关，而Cu与催化活性有关。
6、SOD是其具有还有和失活作用的。
五、药品与仪器：
柠檬三钠，分析纯：江苏花桥北工四厂；
工业丙酮：上海溶剂厂；
邻苯三酚，分析纯：贵州遵义化工厂；
六、SOD的包销单位：
(1)河南郑州国营圣科研究所郑州南阳路14号 邮编：450053《河南科技报》91年10月3日
(2)四川省金堂县工艺制品技校生化科接待室：金堂准口执行的院内，政府办公大楼1楼 邮编：610404 联系人：邓勇 彭丽 《四川农村报》 91年3月1日
(3)广东省深圳市上步区石夏东二苍14号科技所 邮编：518031联系人：黄秋林 《科技消息报》92年7月10日
说明：1、资料后附的产品销售地址信息均为我们从近两年的报刊上摘录的各单位广告，并注明有出处。
2、你先看完资料后，行根据自己的实际情况，先小量试验， 并事先联系好产品的收购单位，待取得经验后再批量生产。
3、读者在联系收购单位时，请一定事先去联系，并附上邮资， 待得到明确答复后再根据情况去人办理，千万不要冒然前往，以免造成不必要的经济负担。
4、原料及仪器各地经营原料店供应，广州市人民南路，上九路等地均有供应。
附：详细SOD收购信息
1、广西南宁市生物化学制药厂
地址：鲁班路1号
2、上海生物化学制药厂
地址：海主路513号
3、江苏徐州市生物化学药厂
地址：海沛路86号
4、山东兖州市生物化学制药厂
地址：肉联厂内
5、湖南常德生物化学制药厂
地址：肉联厂内
6、佛山市生物化学制药厂
地址：佛山市
7、广州市明兴制药厂
地址：广州市河南路工业大道北48号
8、广州市白云制药厂
地址：从广州越绣公园坐21路车到三元里北展下车沿着矿泉别墅侧入200米
9、哈尔滨生化药厂哈肉联厂
地址：哈尔滨道外南极街12号院；电话：88423转制药厂
10、沈阳市生物化学制药厂
地址：哈尔滨皇姑区明廉路2号；
11、江苏省南京生物制药厂
地址：江苏省南京市下关区宝塔桥附近；
12、浙江省金华生物化学制药厂
地址：浙江省金华市河盘桥路51号
13、广东生物制药厂
地址：广州市三元里
14、广东汕头市生物化学制药厂
地址：湖山路西巷3号2号；电话：666124
11、江苏省南京生物制药厂
地址：江苏省南京市下关区宝塔桥附近
12、浙江省金华生物化学制药厂
地址：浙江省金华市河盘桥路51号
13、广东生物制药厂
地址：广州市三元里
14、广东汕头市生物化学制药厂
地址：湖山路西巷3号15.上海霞飞日用化工厂
16.北京丽源日用化工厂
17.南京化妆品厂
18.上海日用化学品二厂
19广州美容化妆品厂
20南京第二药物化学制药厂
上海永芳日用化学品厂
广州化妆品厂
杭州市凤喜化妆品厂
上海日用化学品四厂
天津市津乐制药厂
杭州***生物化学制药厂
上海药物研究所实验药厂
天津市南开区美容化妆品厂
苏州市昊县生物化学厂
上海生物化学制药厂
天津生物医学技术开发中心
上海香海美容品厂
北京日用化学品四厂
武汉市辛安渡制药总厂
湖北沙市生化制药厂
北京市三露厂
注各大制药厂化妆品厂美容院均为销售对象
电话：010-68150495，68212139
传真：010-68212015
地址：北京市石景山区吴家村华电集团大楼三层
通讯：北京市石景山区40-021信箱
邮编：100040
上海平安保险的总部在哪里.？平安在上海浦东新区上丰路1158号，是全国的客服后援中心。然后现在在陆家嘴那边好像在建大厦，上海分公司地址在常熟路8号
去哪购买比较好点的PGK启动子的载体？摘要： HAP转录因子(HAP2/HAP3/HAP4/HAP5) 是存在于酿酒酵母中的一种异源多聚蛋白，它能与酵母中许多启动子上游的CCAAT盒（顺式作用元件）专一性结合， 以增强基因的转录。在酵母hap5突变株的细胞中，用酵母单杂交系统从水稻cDNA-GAL4表达文库中筛选出的阳性克隆是编码谷胱甘肽氧还蛋白的cDNA，提示细胞内的氧化还原系统可能作用于HAP蛋白，从而对CCAAT盒的结合活力起调节作用。 对HAP3亚基分子中半胱氨酸残基的突变实验结果支持上述推测。
关键词： CCAAT，HAP复合物， 转录因子，氧化还原系统
DNA-Binding Activity of the Transcription Factor HAP Is Regulated by Cellular Redox
YAO Quan-Hong, XING Yan-Yan, WANG Zong-Yang, ZHANG Jing-Liu and HONG Meng-Min
Shanghai Institute of Plant Physiology, Chinese Academy of Sciences, Shanghai 200032
Abstract：The CCAAT binding factor of brewer's yeast Saccharomyces cerevisiae has been shown previously to be a heteromeric complex containing HAP2, HAP3, HAP4 and HAP5 subunits. This factor can bind specifically to CCAAT-containing upstream sites within the promoters of numerous yeast genes, and then activate the transcription. By using a yeast one-hybrid system, we tried to isolate the counterpart of the yeast HAP5 gene from rice cDNA-Gal4 fusion library constructed in a E.coli-yeast shuttle vector pPC86. However, we identified a cDNA encoding glutaredoxin (Fig．1). The results indicte that the cellular redox environment of yeast cell m*** be a factor regulating the CCAAT-box-binding activity of the HAP3 subunit (Table 1). The results of the HAP3 mutants in which the highly conserved cysteine residues at positions 68 and 72 had been converted to serine support the above suggestion (Table 2).
Key words: CCAAT, HAP complex, transcription factor, redox system
真核基因转录起始时，有一些被称为转录因子的核蛋白会结合在真核基因启动子上游的顺式作用元件上，以增强或阻遏真核基因的转录(Wolberger 1993)。 有些转录因子要经过磷酸化或二聚化，引起蛋白分子的构型发生一些改变后，才具有与DNA结合的能力（Hunter和 Karin 1992）。最近Zheng 等（1998）报告，有些转录因子与DNA 的结合活力受细胞中的氧化还原状态的调节。例如，用凝胶滞后试验在体外研究Jun和Fos转录因子与含Ap-1结合位点的DNA的结合作用时，观察到硫氧还蛋白(thioredoxin)、还原辅酶Ⅱ(NADPH)与硫氧还蛋白还原酶(thioredoxin reductase)可明显提高它们的异源二聚体与DNA的结合能力(Abate等1990)。
在一些真核基因转录起始点上游存在核心序列为CCAAT的顺式元件，该元件可呈正、反两种方向(Van Huijsduijnen等 1987)。 已知酿酒酵母中至少有16种基因的5’端上游都含CCAAT元件。与这些基因上游的CCAAT结合以调节基因转录的反式作用因子是HAP复合物(Pinkham和Keng 1992)， 它是由HAP2、HAP3、HAP4和HAP5 四个蛋白亚基组成的异源多聚体，其中HAP2和HAP3都含有DNA结合域，但单独的HAP2和HAP3蛋白都不具DNA结合活性，只有当HAP2与HAP3 通过它们的亚基结合域形成二聚体蛋白时才构成一个完整的CCAAT盒结合功能域(Xing 等1993) 。而且体内与体外的研究都证实，这种复合功能域的形成还需要HAP5亚基的参与（McNa***等1995）。HAP4亚基含有活化结构域(activation domain)，起活化基因转录的作用(Foraburg和Guarente 1989)。近年来，已从粟酒裂殖酵母、小鼠、大鼠、人等生物中克隆了编码CCAAT盒结合蛋白的基因， 这些CCAAT结合蛋白与酵母HAP转录因子类似蛋白间存在高度同源的结构域(Van Huijsduijnen等1990)；在高等植物中， 也已从油菜中克隆了与HAP2亚基中DNA结构域高度同源的基因(Albani和Robert 1995)。
我们曾报告，用酿酒酵母CYC1基因启动子上游含CCAAT盒的DNA片段为“鱼铒”，在HAP2基因突变的酵母细胞中，用酵母单杂交方法从水稻cDNA-GAL4 表达文库中筛选出了编码HAP2类似蛋白的cDNA克隆(姚泉洪等待发表)。本研究用相似的方法，在HAP5突变的酵母细胞中，用酵母单杂交方法， 试图从水稻cDNA-GAL4 表达文库中筛选出编码水稻HAP5类似蛋白的cDNA。但HAP5类似cDNA没有筛到，却几次筛选到水稻中编码谷胱甘肽氧还蛋白(glutaredoxin)的cDNA。这一意外的结果提示我们HAP转录因子与DNA结合受氧化还原（redox）调节的可能性。 本文报告上述实验结果以及对HAP3亚基中半胱氨酸残基进行的突变实验，并就HAP转录因子的DNA结合活力是否受氧化还原调节的问题进行了讨论。
1 材料与方法
1.1 工具酶与化学试剂 限制性内切酶和其它基因工程工具酶为德国Boeringer公司产品，X-gal购自Sigma公司，其它化学试剂为美国Sigma公司或国产AR级试剂。
1.2 菌种和质粒 MC8为氨基酸缺陷型大肠杆菌菌株(thi－,trp－,ura－,leu－,his－)。酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）hap5缺陷型菌株为Δhap5-10 (MATα,leu 2-3,112,ura3-52,his4-519,adel-100,trp1 Δhap5)。大肠杆菌-酵母穿梭载体pLG Δ-265 UP1带有lacZ报告基因、URA选择标记、2μ复制序列和酵母CCAAT盒。lacZ报告基因由CYC1的基本启动子控制，而含CCAAT盒的DNA片段位于CYC1的基本启动子上游，此元件被转录因子结合后，即可调节lacZ基因的表达。酿酒酵母-大肠杆菌穿梭载体pPC86带有色氨酸合成酶基因，系朱群博士赠送。pDB20(HAP5)质粒带LEU选择标记，该载体由ADH1启动子控制酵母HAP5基因的表达用作鉴定水稻类似HAP5 cDNA时的阳性对照。pYP2质粒由本实验室构建，它带有PGK启动子及色氨酸合成酶基因，PGK启动子后的BamHⅠ和KpnⅠ切点间插入用于表达的cDNA。
1.3 PCR引物 酵母pPC86载体cDNA插入5'端Gal4激活功能域侧的引物为：GAL4(5'-GGATGTTTAATACCACT-3'）,3'端ADH终止子侧的引物为：TAD4(5'-TTGATTGGAGACTTGACC-3')。水稻谷胱甘肽氧还蛋白cDNA(Minakichi等1994)两侧的引物分别为：5'端翻译启始密码子ATG附近的引物Gluta1(5'AAGGATCCATGGCGCTCGCCAAGGCCAAG 3'), 3'端翻译终止密码子TAG附近的引物Gluta2(5'TTGTGGTACCTATGCGGTGATTGTCGTCTTTG 3')。酿酒酵母HAP3基因(Hahn等1988)两侧的引物分别为：5'端翻译起始密码子ATG附近的引物HAP3Z1(5'AAGGATCCATGAATACCAACGAGTCC 3')，3'端翻译终止密码子TGA附近的引物HAP3F1(5'TTGTGGTACCTCAAGGCACCTCTTCG 3')。用于酿酒酵母HAP3基因第68位Cys突变为Ser的内侧突变引物分别为：含突变碱基的5'端引物HAP3Z2(5' CGAAAGAGTCCATGCAGGAG 3')，含突变碱基的3'端引物HAP3F2(5'CTCCTGCATGGACTCTTTCG 3')。用于酿酒酵母HAP3基因第72位Cys突变为Ser的内侧突变引物分别为：含突变碱基的5'端引物HAP3Z3( 5'CATGCAGGAGTCTGTCAGTG 3') ，含突变碱基的3'端引物HAP3F3(5'CACTGACAGACTCCTGCATG 3')。
1.4 酵母表达型水稻cDNA库 构于酵母载体pPC86的水稻IR36幼苗的表达型cDNA库由美国Salk研究所的朱群博士提供。
1.5 培养基 大肠杆菌MC8生长于添加亮氨酸、尿嘧啶、组氨酸、维生素B1的M9基本培养基， 用于选择带有水稻cDNA的pPC86质粒。含2％葡萄糖或2％乳酸的酿酒酵母丰富培养基YPD、基本培养基SC及酵母X-gal培养基的制备参照Sherman（1991）的方法。
1.6 酵母感受态细胞的制备及质粒转化 酿酒酵母的质粒转化选用Gietz等(1992)的醋酸锂法。于30℃过夜培养5 ml酿酒酵母至OD600为0.5左右，扩大培养至50ml,再生长4h后，5000×g离心8min收集细胞。以20ml无菌水洗，然而把离心收集的酵母以10ml新配的LiAc溶液100mmol/L(用pH 8.0的Tris 10mmol/L、 EDTA 0.1mmol/L 缓冲液配制)洗1次。7000×g离心8min后，最终将酵母细胞悬于0.5ml的LiAc溶液中。50μl的酵母悬液中加入 1μg的质粒DNA、50μg的鲑鱼精DNA及300μl含40% PEG3350的LiAc溶液，充分混匀后于30℃保温30min。接着于42℃热激15min。把离心收集的酵母细胞重悬于TE溶液中，并涂于酵母选择培养基。
1.7 DNA操作 酵母DNA的快速抽提按Robzyk和Kassir（1992）的方法。DNA操作按标准的分子克隆步骤（Sambrook等1989）。大肠杆菌的电击转化按Dower等(1988)的方法。抽提含水稻cDNA阳性质粒的双链DNA，在ABI 377型DNA自动化测序仪上进行序列测定。 引物GAL4与TAD4间的PCR扩增反应条件为：94℃ 40s, 42℃ 50s, 72℃ 3min，共扩增30个循环。水稻谷胱甘肽氧还蛋白cDNA两侧引物Gluta1和Gluta2间的PCR扩增反应条件为：94℃ 30s, 66℃ 45s， 72℃ 30s，共扩增30个循环。酵母HAP3基因的定点突变采用重叠延伸法(Ho等1989)。HAP3外侧引物间及外侧引物与内侧引物突变间的PCR扩增反应条件为：94℃ 30s, 48℃ 40s，72℃ 30s，共扩增30个循环。
2 结果
2.1 酵母单杂交法筛选水稻中类似酵母HAP5基因的cDNA
酵母单杂交体系最初是由Wang和Reed (1993)所设计,它含两个质粒：其一为酵母表达质粒，用于表达cDNA与GAL4激活功能域的融合蛋白;另一质粒将一个顺式作用元件与带有基本启动子的细菌lacZ报告基因连接，该载体称作鱼饵质粒。本实验酵母单杂交体系中所用的鱼饵质粒为pLGΔ-265 UP1，该载体是把含CCAAT的顺式作用元件插入到178载体中CYC1基本启动子上游构建而成。我们先将鱼饵质粒pLGΔ-265 UP1转化入酵母菌株Δhap5-10，在不含尿嘧啶的平皿上得到转化子Δhap5-10(pLGΔ-265 UP1)。然后将30μg含水稻cDNA的pPC86载体转化到感受态酵母中，于不含尿嘧啶和色氨酸的培养基上培养。得到3×106左右的转化子，用硝酸纤维膜将这些转化子复印至X-gal平板上进行显色反应。作为阳性对照，含HAP5基因表达载体pDB20(HAP5）及鱼饵质粒pLGΔ-265 UP1的Δhap5-10酵母菌株经培养6 h后已显蓝色。而含水稻cDNA库的质粒pPC86的Δhap5-10(pLGΔ-265 UP1)酵母菌株2 d后才出现蓝色菌落。此实验重复进行了4次，一共获45个蓝色酵母菌落。
2.2 酵母阳性菌落的重复筛选
为了验证初筛得到的酵母阳性菌落中是否含有相似于HAP5功能的cDNA克隆，从上述45个酵母阳性菌落中抽提DNA，用电击法将DNA转化到大肠杆菌MC8中，培养于2YT+Ap平板，然后复印至不含色氨酸的M9培养基平板上培养。因为pPC86质粒上带有编码TRP合成酶的标记基因，因此能生长出的菌落表明它带有pPC86质粒。然后再从能在不含色氨酸M9培养基上生长的大肠杆菌中抽提质粒DNA，将这些质粒DNA分别转化到酵母Δhap5-10(pLGΔ-265 UP1)菌株中，于X-gal平板上进行显色，从中鉴定出能使酵母菌落重复变蓝的cDNA克隆17个。
2.3 阳性克隆的鉴定和测序
由于hap5缺陷型酵母不能在含非发酵性碳源的培养基上生长，我们将4次酵母单杂交筛选并经复筛后留下的17个阳性质粒转化入Δhap5-10缺陷型酵母进行功能互补法鉴定。结果表明，这些含水稻cDNA的阳性质粒都不能使hap5缺陷型酵母在非发酵性碳源的培养基上生长。它们都没有补偿缺陷型酵母中所缺失的HAP5的功能，因此不是编码类似HAP5的cDNA克隆。为了弄清它们的结构，我们以GAL4和TAD4为引物进行PCR扩增。并对扩增出的cDNA顺序分别进行S***3AⅠ酶切，根据酶切带型对各批筛出的cDNA进行归类。结果表明，17个中有6个筛出的阳性cDNA具类似酶切带型；4次筛库中有3次获得该类cDNA克隆。我们以GAL4和TAD4两引物直接对具相似酶切带型、编号为C3的cDNA进行DNA序列分析，图1的结果显示其核苷酸与已报道的水稻谷胱甘肽氧还蛋白cDNA序列完全相同(Minakichi等1994)。我们又按照所测出的水稻谷胱甘肽氧还蛋白cDNA的核苷酸顺序，合成了cDNA两端的寡核苷酸引物gluta1和gluta2，并对所获的6个具相同酶切带型的cDNA克隆进行PCR扩增，结果也确证它们都是编码水稻谷胱甘肽氧还蛋白的cDNA。
图1 水稻C3 cDNA克隆的核苷酸顺序及推导的氨基酸序列
Fig.1 Sequence of the C3 cDNA clone and predicted amino acid sequence
2.4 C3所编码的谷胱甘肽氧还酶对HAP复合物DNA结合活性的影响
以C3的DNA为模板，用两端分别存在BamHⅠ和KpnⅠ酶切点的gluta1和gluta2为引物进行PCR扩增。将此含glutaredoxin基因完整编码区的PCR扩增片段经BamHⅠ和KpnⅠ酶切后克隆到酵母表达载体pYP2中PGK启动子后的相应酶切点间，构成酵母重组质粒pYP3。接着将pYP2、pDB20、pDB20(HAP5)与pYP3等4种质粒分别转化到已经带有质粒p178或pLGΔ-265 UP1的两酵母菌株Δhap5-10(p178)和Δhap5-10(pLGΔ-265 UP1)中。将上述4种质粒分别转化两株酵母菌株。这两株酵母菌株为hap5突变株，但含有具激活功能的HAP4蛋白，有结合功能的HAP2、HAP3蛋白。在不含尿嘧啶和色氨酸的培养基上得到转化子，并将这8种酵母转化子用硝酸纤维素膜分别复印至X-gal平板上进行显色反应，2 d后转化子Δhap5-10( pYP3+pLGΔ-265 UP1)显蓝色，阳性对照菌株Δhap5-10(pDB20(HAP5)+pLGΔ-265 UP1)菌落呈深蓝色，而阴性对照菌株Δhap5-10(pYP2+pLGΔ-265UP1)和Δhap5-10(pDB20+pLGΔ-265 UP1)以及4种质粒在酵母菌株Δhap5-10(178)中的转化子都没有蓝色显现(表1)。说明glutaredoxin能使HAP2、HAP3与HAP4在没有HAP5的情况下使lacZ基因得到表达。
表1 C3所编码的glutaredoxin对鱼饵质粒上lacZ基因表达的影响
Table 1 Effects of glutaredoxin encoded by C3 on the lacZ gene expression in bait pla***id
Pla***id Expression of lacZ gene
p178 pLGΔ-265 UP1
pYP2 － －
pDB20 － －
pDB20(HAP5) － +++
pYP3 － +
2.5 HAP3蛋白Cys位点突变对HAP复合物DNA结合活性的影响
在hap5缺失型酵母细胞中，glutaredoxin能使HAP2、HAP3与HAP4一起使lacZ表达。由于已知glutaredoxin是参与调节细胞氧化还原状态（redox）的主要成分，因此我们推测它对HAP蛋白的作用可能是调节HAP蛋白中－SH与－S－S的可逆反应。为弄清它是否起这种作用，我们将HAP3基因第68位及第72位Cys突变为Ser，来验证此种推测是否正确。方法是以Δhap5-10菌株DNA为模板，分别以HAP3Z1、HAP3F2及HAP3Z2、HAP3F1这两对引物进行PCR扩增。再以回收的两个PCR产物为模板，通过HAP3Z1和HAP3F1引物扩增出第68位Cys突变为Ser的HAP3基因。并以同样的方法获得第72位Cys突变为Ser的HAP3基因。分别将HAP3基因及两突变基因的BamHⅠ和KpnⅠ酶切产物克隆入pYP2酵母表达载体，构成带有HAP3基因的质粒pYP4、带有第68位Cys突变为Ser的HAP3基因的质粒pYP5及第72位Cys突变为Ser的HAP3基因的质粒pYP6。接着把pYP4、pYP5和pYP6质粒分别转化入含质粒p178和pLGΔ-265 UP1的酵母Δhap5-10菌株中，在不含尿嘧啶和色氨酸的培养基上选择酵母转化子。转化子用硝酸纤维膜复印至X-gal平板上进行显色反应，2 d后两种带有HAP3发生突变基因的质粒的转化子在没有glutaredoxin存在的情况下都显示出蓝色。而带有正常HAP3基因质粒的转化子没有显示蓝色，且转化到Δhap5-10(178)菌株中的4种转化子也没有显示蓝色(表2)。该结果说明在hap5基因突变酵母细胞中，－SH被突变后的HAP3亚基与细胞中的HAP2、HAP4，即能在单杂交系统中使lacZ基因组成性地表达，而无需glutaredoxin的氧还调节。
表2 HAP3蛋白Cys位点突变对鱼饵质粒上lacZ基因表达的影响
Table 2 Effects of mutant HAP3 at cysteine residues on the lacZ gene expression in bait pla***id
Pla***id Expression of lacZ gene
p178 pLGΔ-265 UP1
pYP2 － －
pYP4 － －
pYP5 － +
pYP6 － +
3 讨论
细胞中存在多个调节细胞氧化还原(redox)状态的系统，其中之一为谷胱甘肽氧还蛋白系统，此系统包含谷胱甘肽、谷胱甘肽还原酶与谷胱甘肽氧还蛋白(Holmgren 1989)。该系统通过谷胱甘肽氧还蛋白中半胱氨酸残基上的－SH氧化成－S－S－键或可逆地还原成－SH来调节细胞中的redox状态。这种redox状态也促使某些功能性蛋白分子上的－SH或－S－S－随即发生可逆的氧化或还原，并引起蛋白分子的构型改变，从而影响蛋白分子的活性、稳定性与正确的折叠等重要功能(Holmgren 1989)。
我们在HAP2酵母突变株细胞中，用酵母单杂交方法从水稻cDNA-GAL4 表达文库中成功地筛选到水稻中与HAP2类似的基因RAPB，且RAPB基因可互补酵母的hap2缺陷。这表明用此套单杂交系统来筛选转录因子基因是有效的。按推理，用相同的酵母单杂交系统，在酵母hap5突变株细胞中也应能筛选到水稻的HAP5类似基因，但是所得到的阳性cDNA克隆都不能互补酵母HAP5的缺陷性状。对所得到的阳性cDNA克隆进行核苷酸顺序分析的结果表明，从水稻cDNA文库中得到的这些cDNA所编码的是谷胱甘肽氧还蛋白，而不是期望的水稻编码类似酵母HAP5蛋白。Minakichi等(1994)曾报告水稻glutaredoxin基因的表达主要集中于种子中，而在叶片中的表达很低。而4次筛水稻叶片表达型库过程中有3次筛到glutaredoxin基因，这说明这一实验结果并非偶然。至于为何未筛到HAP5类似基因，是由于我们所用的水稻cDNA-GAL4表达文库中没有HAP5-cDNA，还是由于水稻中没有类似此功能的基因，这还有待进一步研究。
酵母功能互补试验显示水稻glutaredoxin基因没有明显的互补HAP5基因的活性；酵母单杂交试验的结果也说明水稻glutaredoxin基因增强lacZ基因表达的活性远低于HAP5基因。有人推测酵母HAP5蛋白的功能可能是与HAP2和HAP3两亚基间发生疏水相互作用，从而促使形成一种稳定的能结合CCAAT盒的复合结构(McNa***等1995)。如果这种推测是正确的话，那么glutaredoxin的作用也可能是使HAP3亚基保持－SH基状态，从而使HAP2和HAP3之间形成一种不稳定的与CCAAT盒结合较弱的复合结构。glutaredoxin对HAP复合物DNA结合活性的促进及HAP3亚基中半胱氨酸残基突变成丝氨酸残基实验的结果与上述推测较相符。即第68和72位Cys突变为Ser的HAP3蛋白和HAP2蛋白相互作用即具有CCAAT盒结合活性。
到目前为止，已经报告过许多转录因子，如c-fos和c-jun(Abate等1990)，NFκB/Rel(Matthews等 1992)，c-Myb(Guehmann等1992)，BPV-1(McBride等1992)，USF(Pognonec等1992)和NF-Y(Nakshatri等1996)等的DNA 结合活力均受redox调节。其中NF-Y是从人与小鼠细胞中克隆出的能与CCAAT盒结合的转录因子， 它也是异源多聚体蛋白。NF-YA、NF-YB分别为酿酒酵母的HAP2、HAP3的类似基因，两者中有高度同源的结构域，且功能上可互换(Maity等1992, Kim等1996，Coustry等1995)。另外至今所发表的HAP3类似蛋白中3个半胱氨酸残基的位置是保守的(Xing等1993)。
Nakshatri等(1996)报告小鼠的NF-Y转录因子与CCAAT盒在体外的结合活力受redox 状态的调节。硫氧还蛋白可以增强NF-Y异源多聚蛋白与CCAAT盒结合的活力，当－SH基被烷化后NF-Y与CCAAT的结合活性受到破坏。通过将蛋白分子的半胱氨酸残基逐个突变去除，证明受调节的是NF-YB亚基中的第85位与89位上的两个半胱氨酸，已知硫氧还蛋白与谷胱甘肽氧还蛋白一样，也是细胞中一种氧化还原调节系统， 因此我们报告的glutaredoxin在没有HAP5的情况下能使HAP2 与HAP3 结合在CCAAT盒上的发现，与他们的结果特别是硫氧还蛋白对NF-Y蛋白与CCAAT盒结合活性的调节作用可以互为佐证，并对进一步了解HAP5(NF-YC)亚基的功能有重要的意义。
国家自然科学基金(39893320)资助项目。
作者单位：中国科学院上海植物生理研究所，上海 200032
什么花？菊花（和这个差不多）
1.1 概述
菊花（学名Dendranthema morifolium，常用chrysanthemum，拉丁文 Flos Chrysanthemi），多年生菊科草本植物 ，其花瓣呈舌状或筒状。菊花是经长期人工选择培育的名贵观赏花卉，也称艺菊，品种达七千余种。菊花是中国十大名花之一，在中国有三千多年的栽培历史，中国菊花传入欧洲，约在明末清初。中国人极爱菊花，从宋朝起民间就有一年一度的菊花盛会。古神话传说中菊花又被赋予了吉祥、长寿的含义。中国历代诗人画家，以菊花为题材吟诗作画众多，因而历代歌颂菊花的大量文学艺术作品和艺菊经验，给人们留下了许多名谱佳作，并将流传久远。
1.2 简介
菊花，在古神话传说中，菊花被赋予了吉祥、长寿的含义。有清净、高洁、我爱你、真情、令人怀恋、品格高尚的意思。
菊花，别名又叫黄花、寿客、金英、黄华、秋菊、陶菊、艺菊。属于被子植物门双子叶植物纲菊目菊科菊属，多年生菊科草本植物 ，其花瓣呈舌状或筒状。菊花是经长期人工选择培育的名贵观赏花卉，也称艺菊，品种达三千种。
菊花是中国十大名花之一，开封市花，在中国有三千多年的栽培历史，中国菊花约在明末清初传入欧洲。中国人极爱菊花，从宋朝起民间就有一年一度的菊花盛会。古神话传说中菊花又被赋予了吉祥、长寿的含义。中国历代诗人画家，以菊花为题材吟诗作画众多，因而历代歌颂菊花的大量文学艺术作品和艺菊经验，给人们留下了许多名谱佳作，并将源远流长。
菊花的简介(花有一定的食用价值，早在战国时期就有人食用新鲜的菊花。唐宋时期，我国更有服用芳香植物而使身体散发香气的记载。当今在一些发达国家吃花已十分盛行，在我国的北京、天津、南京、广州、香港等地，也日渐成为时尚。
2 特征习性
2.1 形态特征
株高20～200cm，通常30～90cm。茎色嫩绿或褐色，除悬崖菊外多为直立分枝，基部半木质化。单叶互生，卵圆至长圆形，边缘有缺刻和锯齿。头状花序顶生或腋生，一朵或数朵簇生。舌状花为雌花，筒状花为两性花。舌状花分为下、匙管、畸四类，色彩丰富，有红、黄、白、墨、紫、绿、橙、粉、棕、雪青、淡绿等。筒状花发展成为具各种色彩的“托桂瓣”，花色有红、黄、白、紫、绿、粉红、复色、间色等色系。花序大小和形状各有不同，有单瓣，有重瓣；有扁形，有球形；有长絮，有短絮，有平絮和卷絮；有空心和实心；有挺直的和下垂的，式样繁多，品种复杂。
菊花是多年生草本植物，茎直立，分枝或不分枝，被柔毛。叶卵形至披针形，长5～15cm，羽状浅裂或半裂，有短柄，叶下面被白色短柔毛覆盖。头状花序直径2.5～20cm，大小不一。总苞片多层，外层外面被柔毛。舌状花颜色各种。管状花是黄色。
2.2 产地习性
菊属有30余种，中国原产17种，主要有：野菊、白菊花、毛华菊、甘菊、小红菊、紫花野菊、菊花脑等。为多年生草本植物。喜凉爽、较耐寒，生长适温18～21℃，地下根茎耐旱，最忌积涝，喜地势高、土层深厚、富含腐殖质、疏松肥沃、排水良好的壤土。在微酸性至微碱性土壤中皆能生长。而以Ph6.2～6.7***。为短日照植物，在每天14.5小时的长日照下进行营养生长，每天12小时以上的黑暗与10℃的夜温适于花芽发育。
3 营养功效
菊花含有水苏碱、刺槐甙、木樨草甙、***斯菊甙、腺膘呤、胆碱、葡萄糖甙等成分，尤其富含挥发油，并且油
中主要为菊酮、龙脑、龙脑已酸酯等物质。[4]
功效作用方面，性甘、微寒，具有散风热、平肝明目、消咳止痛的功效，用于**头痛眩晕、目赤肿痛、风热感冒、咳嗽等病症效果显著，还具有提神醒脑的功效。
4 药理分析
菊花是菊科植物菊花Chrysanthemum morifolium Ramat 鳞托菊的干燥头状花序，是中国常用中药，具有疏风、清热、明目、解毒之功效。主要**头痛、眩晕、目赤、心胸烦热、疔疮、肿毒等症。现代药理研究表明，菊花具有**冠心病、降低血压、预防高血脂、抗菌、抗病毒、抗炎、抗衰老等多种药理活性。中国药用菊花在市场上有八大主流商品来源，分别为杭菊、亳菊、贡菊、滁菊、祁菊、怀菊、济菊、黄菊，而《中国药典》Ⅰ部（2000年版）根据菊花产地和加工方法的不同，收载了亳菊、滁菊、贡菊和杭菊四个品种。菊花为药食同源植物，国内外对其分类、鉴定、化学、临床、药理等方面均有报道，现仅就国内外对菊花的化学成分和药理活性研究作一概述。
4.1 化学成分
菊花因产地和品种不同，其化学成分有一定的差异。对药典收载的四种来源的菊花的化学成分研究均有报道。研究发现，菊花的化学成分比较复杂，其中黄酮类化合物、三萜类化合物和挥发油是其主要有效成分。
1.黄酮类化合物从菊花中已分离得到的黄酮类化合物有：香叶木素、芹菜素、木犀草素、槲皮素、香叶木素7 OβD糖葡萄苷、芹菜素7OβD葡萄糖苷、木犀草素7OβD葡萄糖苷、金合欢素 7 OβD葡萄糖苷、棉花皮素五甲1 醚、5羟基3',4',6,7 四甲氧基黄酮、橙皮素（hesperetin）、刺槐素（acacetin）、橙皮苷、刺槐苷、金合欢素7OβD半乳糖苷、芹菜素7OβD半乳糖苷、4' 甲氧基木犀草素7OβD葡萄糖苷、baicalin、金合欢素7OβD葡萄糖、dio***etin7OβD葡萄糖。
2 .三萜及甾醇类化合物--从杭白菊中分离得到 5 个甾醇类化合物，分别为棕榈酸16 β，22 α二羟基假蒲公英甾醇酯，棕榈酸16β，28 二羟基羽扇醇酯，棕榈酸16β羟基假蒲公英甾醇酯、假蒲公英甾醇，蒲公英甾醇。Motohiko Ukiya等，学者从菊花中分得一系列三萜二醇、三萜三醇及它们酯类化合物，其中从菊花提取物正已烷部位分离得到32个 3 O脂肪酸酯三萜类化合物，包括棕榈酸酯、肉豆蔻酸酯、月桂酸酯和硬脂酸酯；从非皂苷的脂溶性部位得到 24 个三萜烯二醇和三醇，包括乌苏烷型、羽扇豆烷型、齐墩果烷型、蒲公英烷型等。
3 .挥发油--对不同产地四种菊花：即亳菊、怀菊、滁菊和杭菊中挥发油进行了含量测定，发现滁菊中含量***；同时采用气质联用技术对挥发油成分进行初步研究，鉴定出二十余种萜类成分。应用气质联用技术对怀菊花及大怀菊的挥发油化学成分组成和性质进行了分析，实验结果表明菊花挥发油的主要成分为单萜、倍半萜类及其含氧衍生物；此外从怀菊花挥发油中鉴定了 40 个化合物，从大怀菊中鉴定了 27 个化合物。也采用气质联用技术，对杭菊中挥发油化学成分进行分析，鉴定出 50 个化合物，并确定了各成分的相对百分含量，其实验值为今后进一步开发杭白菊挥发油资源提供了科学依据。
4.其它类成分除上述成分外，从菊花中还分得正戊基甲糖苷、咖啡酸丁酯和乙酯、氯原酸，4 O咖啡酰基奎宁酸，3，4 O二咖啡酰奎宁酸，3，5O二咖啡酰基奎宁酸，Nisobutyl 6 (2 thienyl) 2 E,4 Ehexadienamide,Nisobutyl 2 E,4 E,10 E,12 Etetradecatetraen 8 ynamide,Nisobutyl 2“ E,4 E,12 Ztetradecatrien 8,10 diynamide,Nisobutyl2 E,4 E,12 Etetradecatrien8,10 diynamide。
4.2 药理作用
1. 心血管方面药理作用菊花的酚性部位可以增加豚鼠离体心脏冠脉流量，提高小鼠对减压缺氧的耐受能 矢车菊力，并对家兔的心、肝、肾功能无明显毒性作用。菊花的总提取物对离体心脏、心肌细胞均显示具有正性肌力作用，杭白菊具有抗乌头碱诱发的大鼠心律失常，以及氯仿诱发的小鼠心律失常作用。
⒉ 抗病毒作用国外研究学者发现，菊花对单纯疱疹病毒（HSV1），脊髓灰质炎病毒和麻疹病毒具有不同程度的抑制作用。此外，菊花还具有抗艾滋病的作用，能抑制 ZV 逆转录酶和 HLV 复制的活性，其中从菊花分离得到的金合欢素 7 OβD半乳糖是其活性成分，且毒性很小。
3.抗衰老作用菊花能增强谷胱甘肽过氧化降低，明显延长家蚕寿命；还可以提高小鼠心脑耐缺氧作用，延长其生存时间以及清除自由基的能力，而有人研究则发现，菊花提取物对生物膜的超氧阴离子自由基损伤具有明显保护作用，主要是通过直接进入细胞膜的甘油酯后而起保护作用。这一新的发现使菊花有望开发成为新的功能 菊花性食品，尤其在抗衰老食品中发挥其作用。
4. 抗炎作用早在1950年，有研究者就发现菊花提取物能影响小鼠毛细血管的通透性，增加毛细血管抵抗力，从而具有抗炎作用。国外学者经研究发现从菊花中分离得到的三萜烯二醇、三醇及其相应的棕榈酸酯和肉豆蔻酸酯对由12O十四酰大戟二萜醇 13 酰（TPA）诱发的小鼠耳水肿具有明显的抗炎作用。
5 .抗肿瘤作用从菊花中分离得到的蒲公英赛烷型三萜烯醇类对由 TPA 引起的小鼠皮肤肿瘤有较显著的抑制作用；另外从菊花中分离得到的15个三萜烯二醇及三醇对由 TPA 诱发产生的 BVEA 早期抗原均具有明显的抑制作用，其中 6 个化合物对常见肿瘤如肺癌、结肠癌、肾癌、卵巢癌、脑癌、白血病等 60 种人类肿瘤细胞进行体外细胞毒活性实验，结果发现化合物 arnidiol对白血病 HL60细胞具有极其显著的细胞毒活性，GI50为0.47μmol/L。
5 中药属性
5.1 中药行情
一、品种概况
菊花是一个常用大宗品种，市场流通规格和种类较多，主要有贡菊、怀菊、亳菊、祁菊等。但各自主要面对销售群体有所不同，贡菊、怀菊以茶用为主，亳菊、祁菊以药用为主，茶用为辅。因品种多，现以祁菊为例做以说明。
二、生产概况
祁菊种植历史悠久，河北安国是传统的种植产区。此品采用分根种植，***年菊花收获后，第二年春天根部分蘖，一株菊花可分出10－20棵秧苗。因此菊花生产还是相对来说容易恢复，当地菊花秧苗也少有在市面上销售，成交多在民间之间进行（一般都是免费种植）。
菊花种植简单，投资较低，管理也相对容易，但收获后须经硫磺熏蒸，然后人工进行采摘，采收成本相对较高。
菊花单产量较低，正常年景亩产量在120－150公斤。但当地菊花经过多年种植，近年来品种已显退化迹象，植株分枝数量减少，且病虫害较为严重，因此当地也引进了黄菊花品种，此类品种虽然单产量略高，但商品颜色不及白菊花，因此，市场价格也略低于白菊花。
三、历史价格演变
菊花历史上价格演变相对温和，但震荡频率较高，主要是与其生产特性有直接关系，生产易恢复，产地多，导致价格大涨动力不足；单产低、采摘费时，又支撑其价格难以大幅回落。菊花变化幅度较大的是2010年－2012年这三年，2010、2011受市场大趋势向上的拉动，价格也升到30、40元的高价位，2011年下半年，受生产发展影响，价格下滑至18－20元并一直延续到2012年种植时节，2012年农民种植品种可选择性仍不少，因此即使有秧苗的农民也减少种植或弃种，导致2012年种植面积大幅缩减，种植过后，价格也稳步上涨，产新前好陈货价格一度又升至35元以上。
四、产新情况介绍
菊花去年产新的低价，导致河北、河南、山西、安徽等地菊花种植面积大幅缩减，今年种植面积小是商家的共识。而积压库存也得到有效消化，随着价格的上涨，但市场上货量始终不见增大。今年河北菊花总体长势不错，但临近收获时却因提前的霜冻导致农民采收不及，导致今年菊花新货质量普遍不及往年。
受国家对中药材薰硫的打击，今年不少商家提前准备做无硫加工，但无硫加工成本较高，一吨货烘干费在8000元，因此，又支撑今年菊花价格底部的抬升，现市场无硫菊花售价40元左右，但颇受厂家青睐，将来无硫加工将是祁菊花档次升级的一个途径。
时下，祁菊花新货已有少量上市，开盘价格也一路走高，现八九成干成交价34－35元，六七成干货在24－28元，折成干品在40元左右，因多数常年经营户手中存货不多，加之今年量少，市场经营户购销态度也较为积极。
因今年菊花新货质量不佳，有部分看好商在市场寻购色好陈货，价格在31－35元左右。因今年种植面积不大，加之多是小块种植，因此农民多自行采摘，这将延长新货上市时期，同时也难以集中上市。但年前菊花多是含潮上市，货源干湿度大家也要注意。
菊花今年产新价上一台阶，但多数经营户购货态度较为积极，看来其后市随着货源消化，价格仍有震荡走高可能，但价格过高是否影响销售，商家也须留意。
6 品种分类
菊花品种繁多，头状花序皆可入药，味甘苦，微寒，散风，清热解毒，这就是药菊。
各类菊花按头状花序干燥后形状大小，舌状花的长度，可把药菊分成 4 大类，即白菊花、雏菊花、贡菊花和杭菊花四类。在每一类里则根据原产地取名。在白菊花类里，以产安徽亳州的亳菊品质***，其次如河南武陟的怀菊，四川中江的川菊，河北安国的祁菊，浙江德清的德菊等。
根据花期迟早，有早菊（九月开放），秋菊（十月至十一月），晚菊（十二月至元月），但经过园艺家们的辛勤培植，改变日照条件，也有五月开花的五月菊，七月开花的七月菊,八月开花的八月菊。根据花径大小区分，花径在10cm以上的称大菊，花径在10～6cm的为中菊，花径在6厘米以下的为小菊。根据瓣型可分为平瓣、管瓣、匙瓣三类十多个类型。
我国人民对菊花投以极大的注意和兴趣，最早也并不止因为它有独特的观赏性，主要还在于它的药用价值。在春秋战国时代，屈原的离骚就有“夕餐秋菊之落英”，足见，当时已将菊花的花当作蔬菜使用了。但是，到了汉朝及唐朝对菊花的药用价值引入了极大的注意。菊花的花是清凉药，味寒、甘苦、散风清热，明目平肝。这就叫药菊。根据头状花序大小、色质，药菊也有它自己的分类法。
7 化学成分
1.花含挥发油，成分主要为龙脑（Borneol），樟脑（Camphor），菊油环酮（Chrysanthenone）。
2.还含木犀草素-7葡萄糖甙（Luteolin-7-glucoside），***斯菊甙（Co***osiin）即芹菜素-7-O-葡萄糖甙（Apigenin-7-O-glucoside），刺槐甙（Acacetin-7-Orhamnoglucoside），芹菜素（Apigenin），芹菜素-7-O-鼠李葡萄糖甙（Apigenin-7-O-rhamnoglucoside），刺槐素-7-O-葡萄糖甙（Acacetin-7-O-glucoside）槲皮素-3-O-半乳糖甙（Isorhamnetin-3-O-galactoside），木犀草素-7-O-鼠李葡萄糖甙（Luteolin-7-O-galactoside），木犀草素-7-O-鼠李葡萄糖甙（Luteolin-7-O-rhamnogside），木犀草素（Luteolin），β-榄香烯（β-Elemene），百里香酚（Thymol），二十一烷（Heneicosane），二十三烷（Tricosa-ne），二十六烷（Hexacosane）。
3.糖类和氨基酸。
8 保健价值
***斯菊菊花不仅有观赏价值，而且药食兼优，有良好的保健功效。
【菊花酒】：由菊花加糯米、酒曲酿制而成，古称“长寿酒”，其味清凉甜美，有养肝、明目、健脑、延缓衰老等功效。
【菊花粥】：将菊花与粳米同煮制粥，濡糯清爽，能清心、除烦、悦目、去燥。
【菊花茶】：用菊花泡茶，气味芳香，可消暑、生津、祛风、润喉、养目、解酒。
【菊花糕】：把菊花拌在米浆里，蒸制成糕，或用绿豆粉与菊花制糕，具有清凉去火的食疗效果。
【菊花肴】：由菊花与猪肉、蛇肉炒或与鱼肉、鸡肉煮食的“菊花肉片”，荤中有素，补而不腻，清心爽口，可用于头晕目眩、风热上扰之症的**。
【菊花羹】：将菊花与银耳或莲子煮或蒸成羹食，加入少许冰糖，可去烦热、利五脏、菊花的图片(20张)治头晕目眩等症。
【菊花膏】：以鲜菊花加水煎熬，滤取药汁并浓缩，兑入炼好的蜂蜜，制成膏剂，具有疏风清热、明目之效用。
【菊花枕】：将菊花瓣阴干，收入枕中，对高血压、头晕、失眠、目赤有较好疗效。
【菊花护膝】：将菊花、陈艾叶捣碎为粗末，装入纱布袋中，做成护膝，可祛风除湿、消肿止痛，**鹤膝风等关节炎。
【菊花香气】：有疏风、平肝之功，嗅之，对感冒、头痛有辅助**作用。
注意：菊花茶不宜贪多
世界卫生组织在2008年年底发布的“食物微量脂肪排行榜”中，茶类脂肪被称为世界上***的微量脂肪，绿茶、红茶、乌龙茶尽被归入其中，但是为国人熟知并常喝的菊花茶却并未被列入其中。
据了解，菊花茶中含有的微量脂肪含量仅为0.9%，与菊花中的黄酮共同作用，有清热解毒的作用。但是有研究显示，菊花茶中的微量脂肪有可能让人体发寒，使免疫力下降。中医强调，有些茶饮属清热解毒的药性，应该是在感冒或是感染期中饮用，如平时喝太多，会让体质越来越虚寒。菊花茶即属寒性，对中医所指的“阳虚体质”就不太合适，不能长期大量饮用。此外，有过敏体质的人如果想喝菊花茶，应先泡一两朵试试，如果没问题再多泡。
9 主要用途
9.1 食用菊
主要品种有蜡黄、细黄、细迟白、广州红等，广东为主要产地。这些食用菊主要作为酒宴汤类、火锅的名贵配料，流行、畅销于港澳地区。菊花脑，则为江苏南京地区老百姓喜爱的菜蔬，通常用于作汤或炒食，具有清热明目之功效。
9.2 茶用菊
主要有浙江杭菊、河南怀菊、安徽滁菊和亳菊。茶用菊经窨制后，可与茶叶混用，亦可单独饮用。饮用茶用菊泡出的茶水，不仅具有菊花特有的清香，且可去火、养肝明目。
9.3 药用菊
主要有黄菊和白菊，还有安徽歙县的贡菊、河北的泸菊、四川的川菊等。上面提到的茶菊亦可列入药用区为之中。药用菊具有抗菌、消炎、降压、防冠心病等作用。
还有野菊花也有药用价值，野菊花别名野黄菊花、苦薏 、山菊花、甘菊花。
9.4 观赏菊
菊花为园林应用中的重要花卉之一，广泛用于花坛、地被、盆花和切花等。被山西省太原市作为市花。菊花除具有观赏价值外，还是一种实用植物。实用菊包括食用菊、茶用菊和药用菊等。
10 分类方法
10.1 依颜色分类
这是中国最早的分类法。宋代刘蒙《菊谱》就是依色将36个品种分为黄17品、白15品与杂色4品。
10.2 依高矮分类
按菊株高矮分为高（1m以上）、中（0.5～1m）、矮（0.2～0.5m）3类。
10.3 依花期分类
按开花季节不同，分为春菊、夏菊、秋菊、冬菊及“五九”菊等。秋菊按花期又分为早、中、晚3类。
10.4 依花瓣分类
阳作仁原创菊花图册(20张)1982年全国园艺学会在上海召开的全国菊花品种分类学术讨论会，将秋菊中的大菊分为5个瓣类，30个花型和13个亚型。现列举如下：
一平瓣类：宽带型、荷花型、芍药型、平盘型、翻卷型、叠球型。
二匙瓣类：匙荷型，雀舌型、蜂窝型、莲座型、卷散型、匙球型[1]。
三管瓣类：单管型、翎管型、管盘型、松针型、疏管型、管球型、丝发型、飞舞型、钩环型、璎珞型、贯珠型。
四桂瓣类：平桂型、匙桂型、管桂型、全桂型。
五畸瓣类：龙爪型、毛刺型、剪绒型。
10.5 依种型分类
品种演化次序和栽培、应用进行分类。 六月菊具体分法如下：
一、小菊系（在正常栽培状况下花径小于6cm）：
1.小轮型。
2.小球型。
3.小星型。
4.小桂型。
二、大菊系（在自然栽培状况下花径大于6cm）：
1．瓣子花类（舌状花以平瓣为主）：
观赏花卉菊花
（1）单瓣型。
（2）复瓣型。
（3）莲座型。
（4）翻卷型。
（5）球型。
（6）卷散型。
（7）垂带型。
2．管子花类（舌状花为管瓣）：
野生菊花(6张)
（1）管球型。
（2）管盘型。
（3）披散型。
（4）松针型。
（5）舞环型。
（6）珠管型。
3．桂瓣花类（筒状花呈托桂状）：
（1）托桂型。
4．畸形花类（小花密生毛刺及先端开裂若龙爪等）：
（1）毛刺型。
（2）龙爪型。
10.6 依花径分类
1.大菊 花径10cm以上。
2.中菊 花径6～10cm。
3.小菊 花径6cm以下。
10.7 依日照反应分类
将菊花品种分为：
1.极敏感品种（遮光到现蕾为15～19天）
2.较敏感品种（遮光到现蕾为20～24天）
3.敏感品种（需25～29天）
4.不敏感品种（需30～34天）
5.极不敏感品种（需34天以上）。
10.8 依自然花期分类
夏菊 花期6～9月。
秋菊 花期10～11月。
寒菊 花期12月～翌年1月。
11 繁殖方式
万寿菊菊花的繁殖方式主要有三种：
11.1 分根繁殖
分根繁殖在收割菊花的田间，将选好的种菊报用肥料盖好，以保暖过冬，防止冻害影响成活率，从翌年4月20日到5月中旬之间发出新芽时便可进行分株移栽，分株时将菊花全根挖出，轻轻振落泥土，然后顺菊苗分开，每株苗均带有白根，将过长的根以及苗的顶端切掉，根保留6～7cm，地上保留16cm，可按穴距 40cm×30cm挖穴，每穴栽 1～2株。
11.2 扦插繁殖
扦插繁殖扦插时间根据品种特性和各地气候条件来定。截取无病虫害、健壮的新技作为扦插条，插条长10～13cm，苗床地应平坦，适温15～18℃，土壤不宜过于或过湿。扦插时，先将插条下端5～7cm内的叶子全部摘去，上部叶子保留，将插条插入全中5～7cm深。顶端露出土面3cm左右，浇透水，覆盖一层稻草，约20天生根。
11.3 压条繁殖
压条繁殖在阴雨天进行。***次在小暑（7月上旬）前后，先把菊花枝条压倒，每隔10cm用湿泥盖实，打去梢头，使尖叶腋处抽出新枝，第二次在大暑（7月下旬）前后，把新抽的技压倒，方法同***次，并追施腐熟的人粪尿一次，在处暑（8月下旬）打顶。
14 相关花语
菊花 清净、高洁、怀念、成功
1.黄菊—— 飞黄腾达
2.白菊——哀悼、真实坦诚
3.红菊——我爱你
4.翠菊—— 追想、可靠的爱情、请相信我
5.春菊—— 为爱情占卜
6. 冬菊—— 别离
7.天人菊—— 团结
8.万寿菊—— 友情
9.金盏菊—— 悲伤嫉妒
10.富贵菊—— 富贵荣华、繁茂兴盛
11.矢车菊—— 纤细、优雅、单身的幸福
12.麦杆菊—— 永恒的记忆、刻画在心
13.鳞托菊—— 永远的爱
14.瓜叶菊—— 快乐
15.六月菊—— 别离
16.太阳菊—— 热情、活力
17.波斯菊—— 野性美
18.***斯菊—— 少女纯情
19.法国小菊—— 忍耐
20.蓝色水菊—— 善变固执无情的你
21.雏菊（延命菊）—— 愉快、幸福、纯洁、天真、和平、希望、美人
22.非洲菊（扶郎花）—— 神秘、兴奋、有毅力、适应力强
.pjbox{padding-top:8px;text-align:center}.pjbox a{cursor:pointer;color:#000} 收藏 / 推荐(133) / 要加油(59)
